产品简介：
BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是最常用的蛋白浓度检测方法。
原理：在碱性条件下蛋白质分子中肽键结构与Cu2+络合并将 Cu2+ 还原成 Cu1+。BCA特异地与Cu1+结合形成稳定的蓝紫色复合物，在562nm 处有最大的光吸收值并于蛋白质浓度成正比。该测定方法实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%SDS，5%Triton X-100，5%Tween 20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。
产品特点：
灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，在50-2000 μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系，受样品中离子与去污剂的影响小，可用酶标仪或分光光度计进行检测。
使用方法：
1. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B (50:1) 配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 完全溶解蛋白标准品，取10ul稀释至100ul，使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
3. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。 例如5ml BCA试剂A加100μl BCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室温24小时内稳定。
4. 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的标准品孔中，加用于稀释标准品的溶液补足到20μl。
5. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加用于稀释标准品的溶液到20μl。
6. 各孔加入200μl BCA工作液，37℃放置30分钟。注:也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。
7. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。
包装清单：
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组分列表： |
500T |
2500T |
5000T |
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BCA试剂A |
250ml*2 |
250ml*4 |
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BCA试剂B |
3ml |
15ml |
15ml*2 |
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蛋白标准(5mg/ml BSA) |
3ml |
15ml |
15ml*2 |
常见问题:
1. 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。
2. 是否每次测定时都需要做标准曲线？建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
3. 试剂盒在低温保存可能会出现沉淀，可以37℃孵育使其溶解。
注意事项：
1. 为了加快BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。
2. EDTA浓度必需小于10mM，不兼容EGTA。