产品特色

快速湿式转印槽Fast Wet Transfer Gel Tank

发布时间:2020-12-08 07:47:10 点击:
Fast Wet Transfer Gel Tank快速湿式转印槽
1.1
 简介
Fast Wet Transfer Gel Tank 可同时容纳两个转移电泳夹套,可以被用于聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质样品的转印。
冷却模块是 Fast Wet Transfer Gel Tank 的标准配置,经冷冻后可以吸收在快速转移电泳中产生的热量。使用内置的冷却装置可免除使用昂 贵的外部冷却循环水浴设备,同时免去管路连接的麻烦。
Fast Wet Transfer Gel Tank 的其他特点包括:
1. 新型转印夹上简单易用的闭锁装置、颜色标记的凝胶夹套以及电泳芯便于在转移电泳时的准确定向、特殊设计的插入和拔出装置使操作更 加有效。
2. 专利设计的新型转印夹可以保证液体流在转印时浸润海绵没有死角,可以保证转印的效率。
3. 配套使用的 Fast Transfer Buffer(20X) 可以让转印更高效,迅速。
这些特点都是为了确保使 Fast Wet Transfer Gel Tank 成为一款简便易用、具有完美转印效果的转移电泳系统。

2.1 Fast Wet Transfer Gel Tank 转印槽与配件(如图一所示)
2.2 转印准备
将冷却冰盒放入 -20°C 冰箱中冷冻备用,使用后再放回冰箱中冷冻储存。
1 准备转移缓冲液(推荐 Fast Transfer Buffer(20X) 说明书)(如图二所示)
2.按照凝胶的大小剪切滤纸和膜, 注意在操作膜时一定要戴手套以避免污染。平衡凝胶, 在转移缓冲液中浸泡膜、滤纸和转移衬垫(15 min-1 h,取决于凝胶厚度)
3 制备凝胶三明治夹 : 将新型转印夹的黑色向下放置在干净的托盘上。放置一个预湿润的转移衬垫在夹套的黑色部分上。在转移衬垫上放置 浸湿过的滤纸。把平衡后的凝胶放在滤纸上。(排出凝胶与滤纸之间的气泡) 将浸泡过的膜放在凝胶上。(排出膜与凝胶之间的气泡) 放置滤纸 在膜上并排出所有气泡,然后加上转移衬垫。(如图三所示)

注意:  请将气泡完全排出以得到最佳的转移效果,可使用玻璃棒轻轻滚动将气泡赶出。
 
4 夹紧夹套,小心不要移动凝胶和滤纸三明治,用白色滑块锁住夹套。
5 将凝胶三明治夹插入转印内芯中,重复上述步骤制备另一个凝胶三明治夹。(如图四所示)
6.放入缓冲液槽中加入冷冻的冷却冰盒,用缓冲液充满。(如图五所示)
7 盖上转印槽安全盖,  将电源线缆插入电源开始转印,  请确保此步电源正负极连接正确。(缓冲液的电压设定和转印时间参见 Fast Transfer Buffer(20X) 说明书)(如图六所示)
8 电泳结束后,分解三明治夹,将膜取出继续下一步操作。以实验室用中性洗涤剂清洗转印槽、夹套、衬垫等,再以去离子水冲洗干净。

2.3
 酸性转移
酸性转移是为蛋白等电点在碱性范围(pH10 附近) 的蛋白进行的转移,本说明书不对此做过多说明只指明操作方式,请自行设计转印条件。 酸性转移是在酸性条件下进行,请交换凝胶与膜的位置,将膜放在凝胶的负极一端。
在酸性条件下,蛋白质将向相反方向转移— 向负电极方向泳动。不要反转电极本身,否则将损坏电泳槽。

3.1 转移缓冲液和运行条件的常规指南
本转印槽建议使用配套的 Fast Transfer Buffer(20X)( 货号:  F00002Gel),使用条件请参照 Fast Transfer Buffer(20X) 使用说明书。如果有使 用其他形式转印液,请自行设定转印条件。
4.1 蛋白印记膜
硝酸纤维素膜
硝酸纤维素膜被广泛用于蛋白的结合与检测。它的总蛋白检测可以简单地用蛋白染料(如:氨基黑、考马斯兰、丽春红 S、固绿 FCF 等) 或更  加灵敏的胶体金染料染色, 并可以进行放射性免疫分析(RIA)、荧光免疫分析(FIA)和酶联免疫分析(EIA)。硝酸纤维素膜具有 80-100 μg/cm2   的较高结合容量, 不需预处理, 非特异性蛋白结合位点容易被封闭, 避免了背景问题的出现。低分子量蛋白(分子量 <20 KD)容易在转移后的  冲洗中丢失, 造成检测灵敏度降低。更小孔径的硝酸纤维素膜(0.2 μm)可以消除这一现象。被 SDS 变性的大分量蛋白(>100 KD)由于转移缓  冲液中甲醇的存在将会难于被转移。甲醇可以增强 SDS 蛋白与硝酸纤维素的结合,但同时也会收缩凝胶的孔径。从 SDS 蛋白转移中去除甲  醇会造成结合的明显减少。在转移缓冲液中增加 SDS(至 0.1%)会使蛋白的转移效率增加, 但结合量减少。SDS 同样会使缓冲液的电导增强, 在转移中产生较多的热。
PVDF 
PVDF(聚偏二乙烯二氟) 膜是理想的氨基末端测序、氨基酸分析和印迹蛋白免疫测定的支撑。PVDF 能在极端条件下, 如暴露在酸、碱环境,  在有机溶剂中, 保留蛋白质。在测序操作中, 强大的保持力以增强的初始结合以及高重复性的收益, 提高了得到珍惜的低丰度蛋白信息的可能
性。另外, 在含有 SDS 的转移缓冲液中, PVDF 膜展现了更佳的结合效率。PVDF 膜必须在使用前以 100% 甲醇浸湿, 然后用于不含甲醇的缓冲液。



 
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